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自誘導TB培養基Terrific Broth

更新時間:2022-05-08   點擊次數:2069次

Autoinductive Terrific Broth產品基本信息

產品名稱:自動誘導TB培養基;自動誘導超級肉湯
英文名稱:Autoinductive Terrific Broth;Terrific Broth - Auto Induction Medium
培養基類型:加富培養基
級別:for microbiology
品牌:GRiSP
產品目錄號:GCM19.0500
產品規格:500g
產品外觀:米色均一粉末。
滅菌后顏色與澄清度:琥珀色透明溶液。
保存條件:密封,2-25°C保存。
注意事項:避免攝入、吸入、皮膚接觸。

TB-AIM.jpg

產品描述:

自動誘導超級肉湯(Autoinductive Terrific Broth)也稱自動誘導TB培養基,用于Lac啟動子驅動的大腸桿菌重組蛋白表達,無需添加IPTG。自誘導TB培養基能夠獲得高細胞密度,蛋白表達率高出IPTG誘導過程好幾倍。


工作原理:

Terrific Broth 由LB培養基改進而來,目的是獲得高密度細胞。E. coli在該培養基中生長速度快于其在LB培養基或 2x YT肉湯中的生長速度。使用TB培養基還可以獲得高產量質粒DNA和重組蛋白。

通常,外源蛋白在細菌中表達時常使用IPTG誘導的啟動子,如Lac啟動子。當細胞密度達到理想值時,通過向培養基中加入IPTG的方法誘導蛋白表達。使用這個自動誘導培養基,不再需要監測細胞密度和添加IPTG。葡萄糖作為半乳糖操縱子的阻遏因子阻止細菌利用α-乳糖,而被優先代謝,促進高密度生長。一旦培養基中的葡萄糖被耗盡(通常發生在對數期的后期),乳糖被?-半乳糖苷酶轉換成異乳糖(葡萄糖-1,6-半乳糖),而后者作為IPTG誘導型啟動子的誘導劑,引起乳糖阻遏子從與DNA結合的位點上釋放,啟動重組蛋白的表達。對于DE3基因型的E.coli中,異乳糖使T7lac啟動子去阻遏,并誘導lacUV5啟動子表達T7 RNA聚合酶。通過這種方式,在細菌培養物生長到某一特定點時蛋白表達自發開始,去掉了監測細胞密度(OD600)和添加IPTG這兩個步驟。與傳統IPTG誘導的蛋白表達過程相比,使用自動誘導培養基極大地方便和簡化了試驗流程。另外還便于多克隆分析,如藍白斑篩選。

該培養基中含有理想比例的葡萄糖和α-乳糖作為碳源和能量來源。胰蛋白胨提供氮源、維生素、礦物質和氨基酸,這些營養成分是細胞生長所必需的。酵母提取物是豐富的B族維生素來源。Studier salts為細菌細胞的生長提供最佳的生理環境。


配方與配制方法

Tryptone12.0 g
Yeast Extract24.0 g
α-乳糖2.0 g
葡萄糖0.5 g
Studier鹽17.05 g
Final pH7.0 ± 0.2


1. 稱取55.55g 脫水培養基粉末,用1L去離子水加熱溶解。
2. 煮沸1min。
3. 115°C 滅菌20min。

不要過度加熱,避免乳糖分解和培養基顏色加深。冷卻后保存在2-8oC,如果不染菌,可以保存2個月左右。

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